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介紹糞便鈣衛蛋白試劑盒的操作步驟

2019-05-20 瀏覽次數：2929

糞便鈣衛蛋白是診斷腸炎疾病嚴重性的一個指標，腸炎性疾?。↖BD）患者的糞便鈣衛蛋白濃度高，其疾病復發的風險增大。低糞便鈣衛蛋白濃度與腸的同種異體移植排斥的低風險相關。該檢測使用特異性單克隆抗體，確保測試只檢測到鈣衛蛋白。因此糞便鈣衛蛋白試劑盒是比不可少的。

糞便鈣衛蛋白試劑盒的操作步驟主要分為FC測定抽提步驟和ELISA步驟：

一、FC測定抽提步驟：

1、將空的15ml聚丙烯試管連同接種環一起稱重，將精密天平歸零。

2、冷凍糞便在室溫下解凍后，用接種環挑取50~100mg糞便，準確稱重。

3、按糞便重量(mg):抽提緩沖液體積(ml)=1:49的比例加入抽提緩沖液，蓋上試管。

4、在渦旋振蕩器上渦旋5分鐘，直至混勻。

5、將混勻的液體移入2ml離心管，高速離心5分鐘。

6、將上清液移入標記好的試管中。

二、ELISA步驟：檢測前將試劑平衡至室溫

1、用孵育緩沖液將糞便抽提液按照1:150稀釋，充分混勻。

2、將試劑盒中96孔板清洗2遍，甩干。

3、分別吸取100ul稀釋后的樣本，標準品及質控品以此類推。

4、用封膜封板，置于水平搖床，18~28°C孵育30分鐘。300轉/分鐘。

5、清洗5遍.

6、每孔均加入100ul酶標液。

7、用封膜封板，置于水平搖床上，18~28°C孵育30±5分鐘。300轉/分鐘。

8、清洗5遍，甩干。

9、每孔均加入100ulTMB底物液。

10、用封膜封板，置于水平搖床上，避光，18~28°C，孵育15±2分鐘。

11、每孔均加入100ul終止液，用吸頭除去氣泡，30分鐘內進行第13步。

12、用酶標儀在450nm處讀數。

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